编译：唐宁

目前临床实验室常用一步法（one-stageassay,OSA）检测凝血因子VIII、IX来诊断血友病，尽管使用方便、广泛，但OSA被认为在30%轻到中度血友病的诊断中可能低估或高估因子水平，在血友病携带者（特别是乙型）中也是如此。而在应用重组VIII、IX因子制剂的患者中，基于APTT试验的OSA准确度更低。目前有一些研究已表明发色法检测凝血因子准确度好于OSA，尽管还需要更多的数据证实。ISTH也认为实验室在血友病（特别是轻型）的诊断中同时采用两种方法检测，可以减少误诊或漏诊的几率。

OSA与发色法的检测原理分别如下两图：

OSA：

发色法：

以甲型血友病为例，OSA与发色法检测结果的不一致是有遗传学基础的，通常是由于错义突变影响到活化VIII因子的稳定性，或影响VIII因子顺利结合到活化IX因子、VWF或凝血酶上的能力。1.聚集在VIII因子A1-A2-A3结构域的错义突变导致活化VIII因子稳定性降低，这在发色法中更为显著，因为发色法活化VIII因子生成后会存在较长时间，而在OSA中活化状态的VIII因子仅存在很短的时间。2.OSA中各凝血因子均处于生理浓度，更容易识别错义突变对VIII因子结合到凝血酶切割位点或活化IX因子结合位点的影响，不像发色法中因子浓度被优化了。此外发色法中长时间的温育有助于克服突变对结合过程的干扰。

采用OSA监测重组凝血因子的替代治疗，大约50%的患者因子检测结果可能不准确，因为因子检测使用的人源定标血浆往往不适合用来评估重组因子水平。因此可考虑使用加入重组因子制剂的血浆作为定标品，但这需要实验室了解和获取每位患者具体使用的因子制剂类型，非常困难。另一个方法是，由重组因子制剂厂家针对每种因子检测试剂预先确定一个校正系数，提供给实验室，实验室只需在常规定标时输入这个系数即可，这需要制药商、试剂商、临床科室和医学实验室共同确定一个合适的程序。而绝大部分VIII、IX因子制剂可被发色法准确监测，即使使用常规定标血浆。

总之，目前的数据认为发色法检测凝血因子准确度更高，尽管现在仅有少数临床实验室能够开展这项检测，但发色法确实有助于减少非重型血友病的误诊或漏诊。