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年3月，陈赛娟院士在《CLINICALANDTRANSLATIONALMEDICINE》杂志发表题名为“ActivatedfactorXtargetedstoredinplateletsasaneffectivegenetherapystrategyforbothhemophiliaAandB.”——靶向储存在血小板中的活化因子X用于A型及B型血友病的基因治疗研究的论文。

血液研究所陈赛娟院士、章国卫客座研究员为论文的共同通讯作者，国家转化医学中心（上海）王大威助理研究员，上海医院邵小虎博士，血液学研究所王嫱博士研究生为论文的第一作者。

doi:10./ctm2..

血友病A（HA）和B（HB）是一类由于凝血因子VIII（FVIII）或者IX（FIX）缺乏导致的严重出血性遗传疾病。男性为其主要发病人群，HA发病率为1/，HB发病率约为1/。血友病目前的常规治疗为定期输注缺陷的凝血因子，但由于价格昂贵加之来源受限，绝大多数家庭承担不起治疗费用。此外，凝血因子的长期输注会导致大量的病人产生抑制物，使得替代治疗的疗效下降甚至无效，因此亟待开发新的疗法。

在凝血级联反应中，FIXa/FVIIIa或FVIIa/TF复合物均能激活FX，使其生成FXa而将凝血酶原转换成凝血酶，从而发挥止血效应。因此FXa具有作为血友病旁路治疗的可能性。基于本研究组和其他研究组在血友病替代疗法和靶向血小板基因治疗的前期研究基础上，本研究组推测靶向储存在血小板中的FXa可能会对产生抑制物的HA和HB均有治疗作用。

为了实现FXa在血小板中存储的目的，研究组构建了整合素αIIb启动子驱动下的FXa前体，控制其在血小板中的靶向表达及储存。经由慢病毒介导的2bFXa表达元件转导进小鼠的造血干祖细胞（HSPC），并移植到HA、HB小鼠及产生抑制物的小鼠模型中。通过体内及体外实验检测到到FXa稳定地储存在血小板α-颗粒中，并且储存的FXa在血小板活化后可释放出并发挥凝血功能。一次和二次移植的受体小鼠均能长期维持FXa的表达。通过使用鼠尾出血分析和血栓弹力图等方式评估血小板存储的FXa对血友病出血表型的治疗效果，发现血小板存储的FXa可以显著减轻HA、HB小鼠以及产生抑制物小鼠模型的出血，其凝血时间显著缩短，出血量也明显减少。同时，移植受体小鼠的血浆中未检测到FXa的泄露。通过移植受体小鼠和脂多糖诱导的炎症小鼠模型初步评估均未发现增加形成血栓的风险。基于以上分析可证实该疗法的长期疗效及初步安全性，为其临床转化奠定了基础。

基于靶向血小板的FXa基因治疗策略从理论上证明了靶向血小板表达FXa前体可在血小板α颗粒中形成FXa的储存池，且血小板储存的FXa可有效地治疗产生抑制物的HA和HB。这种新型基因治疗策略具有实现单次治疗，长期甚至终身有效的潜能。这对于减轻病人痛苦，提高生活质量，具有较大的临床应用价值。

本研究是在评估目前血友病基因治疗的不足之处及FXa治疗血友病研究中的瓶颈而提出。靶向血小板表达的2bFXa-HSC进行血友病的基因治疗可以充分发挥血小板与凝血因子的综合优势。此外，该策略具有一次用药治愈血友病的潜质，从而改善目前血友病患者的治疗现状，同时也可减少血源性制品的消耗，具有一定的社会经济学价值。

Background:Treatmentofhemophiliacswithinhibitorsremainschallenging,andnewtreatmentsareinurgentneed.CoagulationfactorXplaysacriticalroleinthedownstreamofbloodcoagulationcascade,whichcouldserveasabypassingagentforhemophiliatherapy.Baseonplatelet-targetedgenetherapyforhemophiliabyourandothergroups,wehypothesizedthatactivatedfactorX(FXa)targetedstoredinplateletsmightbeeffectiveintreatinghemophiliaA(HA)andB(HB)withorwithoutinhibitors.

Methods:ToachievethestorageofFXainplatelets,weconstructedaFXaprecursorandusedtheintegrinαIIbpromotertocontrolthetargetedexpressionofFXaprecursorinplatelets.Theexpressioncassette(2bFXa)wascarriedbylentivirusandintroducedintomousehematopoieticstemandprogenitorcells(HSPCs),whichwerethentransplantedintoHAandHBmice.FXaexpressionandstorageinplateletswasexaminedinvitroandinvivo.Weevaluatedthetherapeuticefficacyofplatelet-storedFXabytailbleedingassaysandthethrombelastography.Inaddition,thromboticriskwasassessedintherecipientmiceandthelipopolysaccharideinducedinflammationmice.

Results:Bytransplanting2bFXalentivirus-transducedHSPCsintoHAandHBmice,FXawasobservedstablystoredinplateletα-granules,thestoredFXaisreleasableandfunctionaluponplateletactivation.Theplatelet-storedFXacansignificantlyamelioratebleedingphenotypeinHAandHBmiceaswellasthemicewithinhibitors.Meanwhile,noFXaleakageinplasmaandnosignsofincreasedriskofhypercoagulabilitywerefoundintransplantationrecipientsandlipopolysaccharideinducedsepticemiarecipients.

Conclusions:Ourproof-of-principledataindicatedthattargetexpressionoftheFXaprecursortoplateletscangenerateastoragepoolofFXainplateletα-granules,theplatelet-storedFXaiseffectiveintreatingHAandHBwithinhibitors,suggestingthatthiscouldbeanovelchoiceforhemophiliapatientswithinhibitors.

背景：产生抑制物血友病患者的治疗仍然具有挑战性，因此迫切需要开发新的治疗策略。凝血因子X在凝血级联反应的下游发挥关键作用，具有作为血友病旁路治疗的可能性。基于我们和其他研究组在靶向血小板基因治疗血友病的前期研究上，我们推测靶向储存在血小板中的活化因子X（FXa）可能会对是否产生抑制物的血友病A（HA）和B（HB）均有治疗作用。

方法：为了实现FXa在血小板中的存储，我们构建了整合素αIIb启动子驱动下的FXa前体，并控制其在血小板中的靶向表达。经由慢病毒介导的2bFXa表达元件转导进小鼠的造血干祖细胞（HSPC），并移植到HA、HB小鼠及产生抑制物的小鼠模型中。我们通过体外及体内实验检测FXa在血小板中的表达和储存，并使用鼠尾出血分析和血栓弹力图等方式评估血小板存储的FXa对血友病出血表型的治疗效果。此外，通过移植受体小鼠和脂多糖诱导的炎症小鼠模型初步评估该策略的血栓形成风险。

结果：通过将2bFXa慢病毒转导的HSPC移植到HA和HB小鼠中，可以观察到FXa稳定地储存在血小板α-颗粒中，并且储存的FXa在血小板活化后可释放出并发挥相应功能。血小板存储的FXa可以显著减轻HA、HB小鼠以及产生抑制物小鼠模型的出血表型。同时，移植受体小鼠的血浆中未检测到FXa的泄露，在移植小鼠及脂多糖诱导的败血症受体小鼠中均未发现高凝状态的迹象。

结论：我们的原理论证数据表明，靶向血小板表达FXa前体可在血小板α颗粒中形成FXa的储存池，且血小板储存的FXa可有效地治疗产生抑制物的HA和HB，表明该策略可能是产生抑制物血友病患者的新选择。

作者简介

陈赛娟研究员，博士生导师，中国工程院院士，上海交通大学医学院教授，上海交通大医院终身教授，国家转化医学中心（上海）主任，医学基因组学国家重点实验室主任，上海血液学研究所名誉所长，上海市科协主席，中华医学会副会长，发展中国家科学院院士，法国医学科学院外籍院士，英国皇家内科医师学院院士；研究方向：血液病的发病机制和新型靶向治疗研究。

章国卫客座研究员，上海交通大医院/上海血液学研究所；研究方向：出凝血疾病的基础与转化研究.

王大威助理研究员，上海交通大医院/国家转化医学中心（上海）；研究方向：遗传/罕见病及肿瘤性疾病的基因与细胞治疗临床转化研究。

王嫱博士研究生，上海交通大医院/上海血液学研究所；研究方向：血友病B的AAV治疗研究。